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      脂氧合酶活性測定試劑盒說明書
      
        
      點擊次數(shù)：937     發(fā)布時間：2021/6/2
      
        
      
      
      
        
      
          
            
      
              
      
                
                  
      
                    
      
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      脂氧合酶（Lipoxygenase, LOX）活性測定試劑盒說明書 
      分光光度法 50 管/24 樣 
      注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。 
      測定意義： 
      LOX 廣泛存在于動植物組織中，催化不飽和脂肪酸氧化反應，導致膜脂過氧化。在生物體 
      的生長發(fā)育、成熟衰老及逆境脅迫過程中具有重要作用。 
      測定原理： 
      LOX 催化亞油酸氧化，氧化產物在 280nm 處有特征吸收峰；測定 280nm 吸光度增加速率， 
      來計算 LOX 活性。 
      自備儀器和用品： 
      研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計、1mL 石英比色皿、可調式移液槍和蒸餾水。 
      試劑組成和配制： 
      試劑一：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。 
      試劑二：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。 
      試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。 
      粗酶液提?。?
      按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 
      試劑一）進行冰浴勻漿。16000g，4℃離心 20min，取上清置冰上待測。 
      測定： 
      1. 分光光度計預熱 30 min，調節(jié)波長到 280nm，蒸餾水調零。 
      2. 在試劑三中加入 25mL 試劑二（振蕩混勻 1min），在 30℃水浴中預熱 10 min 以上。用不 
      完的試劑 4℃保存。 
      3. 對照管：依次在 1mL 
      石英比色皿中加入 
      100μL 
      樣本和 
      900μL 
      試劑二，30℃反應 
      30min 
      后，記錄 A 對照。 
      4. 測定管：依次在 1mL 
      石英比色皿中加入 
      100μL 
      樣本和 
      900μL 
      試劑三，30℃反應 
      30min 
      后，記錄 A 測定。 
      5. ΔA=A 測定-A 對照 
      LOX 活性計算公式： 
      （1）按照蛋白濃度計算 
      活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘催化吸光值變化 0.01 個單位為 1 個酶活單位。 
      LOX (U/mg prot) =ΔA×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T×100 
      = 33.33×ΔA÷Cpr 
      （2）按照樣本質量計算 
      活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘催化吸光值變化 0.01 個單位為 1 個酶活單位。 
      LOX (U/g 鮮重) =ΔA×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T×100 
      = 33.33×ΔA÷W 
      Cpr：上清液蛋白濃度，mg/mL，需另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質含量測定試劑盒； 
      V 樣：加入反應體系中上清液體積，100μL=0.1mL；V 反總：反應總體積，1mL；V 樣總： 
      上清液總體積，1mL；W：樣本質量，g；T：反應時間，30min。
      
                    
       
      
                  
      
                      		
              
      
            
      
                		
        
      
      
      
      
      
      
    
      
    
      
  
      

      



      


      
	
      
		
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