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      新品上市:谷氨酰胺酶活性檢測試劑盒

      點(diǎn)擊次數(shù):1311     更新時(shí)間:2016-05-13

      新品上市:谷氨酰胺酶活性檢測試劑盒,歡迎信帆生物!

      谷氨酰胺酶(glutaminase, GLS) 活性測定試劑盒說明書
      分光光度法 50 管/48 樣
      正式測定前務(wù)必取2-3 個預(yù)期差異的樣本做預(yù)測定
      測定意義:
      GLS(EC 3.5.1.2)存在于高等動物和某些細(xì)菌以及植物根中,催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和
      氨,在氮素代謝中具有重要調(diào)控作用,尤其是調(diào)節(jié)游離氨含量和尿素代謝。
      測定原理:
      GLS 催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨,利用奈氏試劑檢測氨增加的速率,即可計(jì)算其酶
      活性。
      需自備儀器和用品:
      臺式離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、水浴鍋、1mL 玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽、冰和蒸
      餾水。
      試劑組成和配制:
      試劑一×1 瓶,60 mL,4 ℃保存;
      試劑二×1 瓶,20 mL,4 ℃保存;
      試劑三×1 瓶,30 mL,常溫保存;
      試劑四×1 瓶,10 mL,常溫保存;
      試劑五×1 瓶,6 mL,常溫保存;
      試劑六×1瓶,6 mL,常溫避光保存。
      粗酶液提取:
      1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:
      細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量
      (104 個):試劑一體積(mL)為500~1000:1 的比例(建議500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL 試
      劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30 次);
      8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
      組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g 組織,
      加入1mL 試劑一),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
      2、血清(漿)樣品:直接檢測。
      測定步驟:
      1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長至420nm,蒸餾水調(diào)零。
      2、樣品測定(在EP 中加入下列試劑):
      試劑名稱(uL) 測定管 對照管
      樣本 25
      蒸餾水 25
      試劑一 100 100
      試劑二 400 400
      混勻,37℃水浴1 小時(shí)
      試劑三 525 525
      混勻,8000 g,25℃離心10 min;取上清液,在EP 管中加入下列試劑
      上清液 650 650
      試劑四 150 150
      試劑五 100 100
      試劑六 100 100
      混勻,420nm 處讀取吸光值A(chǔ),計(jì)算ΔA=A 測定管-A 對照管。對照管只要做一管
      計(jì)算:
      1、血清(漿)GLS 活性
      單位定義:每mL 血清(漿)每小時(shí)催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定義為一個酶活力單位。
      GLS(μmol /min/mL)=363.1×(ΔA-0.1301)÷T=363.1×(ΔA -0.1301)
      2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞GLS 活性
      (1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
      單位定義:每mg 蛋白質(zhì)每小時(shí)催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定義為一個酶活力單位。
      GLS(μmol /min /mg prot)=363.1×(ΔA-0.1301)÷Cpr÷T=363.1×(ΔA -0.1301)÷Cpr。
      (2)按樣本鮮重計(jì)算:
      單位定義:每g 組織每小時(shí)催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定義為一個酶活力單位。
      GLS(μmol /min /g 鮮重)=363.1×(ΔA-0.1301)÷(W÷V 樣總) ÷T=363.1×(ΔA -0.1301)÷W。
      (3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
      單位定義:每1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞每小時(shí)催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定義為一個酶活力單位。
      GLS(μmol /min /104 cell)=363.1×(ΔA-0.1301)÷(500÷V 樣總)÷T =0.7262×(ΔA -0.1301)
      V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1h;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:
      樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬。

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