谷-胱甘肽還原酶(GR)測(cè)試盒

（50 管/48 樣）

一、測(cè)定意義：

谷-胱甘肽還原酶(Glutathione Reductase)是一種黃素酶，

每分子酶蛋白含有一分子的 FAD。由輔酶 NADPH 供氫，

催化氧化型谷-胱甘肽（GSSG），還原成還原型谷-胱甘肽

（GSH）。還原型谷-胱甘肽（GSH）可使含巰基（-SH）的

酶處于還原狀態(tài)及活性狀態(tài)，維持紅細(xì)胞膜的完整性，防止

血紅蛋白氧化。

GR 定位于微粒體及細(xì)胞液部分。因各臟器的組織細(xì)胞

普遍含有 GR，因而 GR 在機(jī)體的氧化還原反應(yīng)中起了舉足

輕重的地位。

二、測(cè)定原理：

氧化型谷-胱甘肽（GSSG）在谷-胱甘肽還原酶 GR 的催

化下，由 NADPH 供氫，使 GSSG 還原生成還原型谷-胱甘肽

(GSH)后，GSH 增加，NADPH 減少。在 340nm 處可檢測(cè)到

NADPH 的吸光度值的下降。

三、試劑組成：（50 管/48 樣）

試劑一：60mL×2 瓶，4℃保存 6 個(gè)月。

試劑二：粉劑×4 支，

4℃保存 6 個(gè)月；用時(shí)每支加雙蒸水 1mL

充分溶解后備用，4℃保存。

試劑三：粉劑×2 支，

4℃保存 6 個(gè)月；用時(shí)每支加雙蒸水 1mL

充分溶解后備用，-20℃以下保存。

工作液的配制：按試劑一︰試劑二︰試劑三=2300︰60︰30

的比例進(jìn)行配制，用多少配多少，現(xiàn)用現(xiàn)配，余下

的 4℃保存 4～5 天（使用前在 37℃預(yù)溫 5 分鐘）。

四、血清（漿）中 GR 活力的測(cè)定：

1、血清（漿）樣本前處理：

血清不需要離心；血漿要 2000～3000 轉(zhuǎn)/分，離心 8 分鐘。

2、血清（漿）中 GR 活力測(cè)定的操作過程：

①、將紫外分光光度計(jì)于 340nm 處，1cm 光徑石英比色皿，

用雙蒸水調(diào)零；(石英比色皿準(zhǔn)備兩只,一只用于調(diào)零,

一只用于測(cè)定)。

②、往相應(yīng)編號(hào)的試管中加入 50μL 新鮮血清（漿），吸取

工作液 2.4mL 沖入試管中，快速混勻，并計(jì)時(shí)；

③、迅速倒入石英比色皿中，紫外分光光度計(jì)，340nm 處

比色，30 秒時(shí)讀取吸光度值 A1；

④、將此反應(yīng)液倒入原試管中置 37℃準(zhǔn)確水浴 2 分鐘，再

迅速倒入石英比色皿中，

2 分 30 秒時(shí)讀取吸光度值 A2；

⑤、求出 2 次吸光度差值（△A=A1-A2）。

[注]：第一次讀數(shù)時(shí)的時(shí)間可以不固定(20 秒、40 秒等都可

以，但不要太長(zhǎng)），只要讀 A1 和 A2 之間的時(shí)間差為

2 分鐘即可；如果 A1 和 A2 值接近，可以增加樣本體

積，或者延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（如 5min 或 10min）。

3、血清（漿）中 GR 的計(jì)算：

①、血清（漿）中 GR 的活力單位定義：

每升血清（漿）每分鐘使反應(yīng)體系中底物 NADPH

的濃度改變 1mM 所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

6.22 為 NADPH 在 340nm 波長(zhǎng) 1cm 光徑的消光系數(shù)。

d：比色光徑，1cm；

T：反應(yīng)時(shí)間，2min；

V 樣：取樣量，0.05mL。

五、組織勻漿中 GR 活力的測(cè)定：

1、組織樣本的前處理：

準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量（g）:體積（mL）=1:9 的

比例，加入 9 倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下機(jī)械勻漿，

制成 10%的組織勻漿，2500 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，取上清

液待測(cè)

2、組織中 GR 活力測(cè)定的操作過程：

①、將紫外分光光度計(jì)于 340nm 處，1cm 光徑石英比色皿，

用雙蒸水調(diào)零；(石英比色皿準(zhǔn)備兩只,一只用于調(diào)零,

一只用于測(cè)定)。

②、往相應(yīng)編號(hào)的試管中加入 20μL 組織勻漿上清液，吸取

工作液 2.4mL 沖入試管中，快速混勻，并計(jì)時(shí)；

③、迅速倒入石英比色皿中，紫外分光光度計(jì)，340nm 處

比色，30 秒時(shí)讀取吸光度值 A1；

④、將此比色液倒入原試管中置 37℃準(zhǔn)確水浴 2 分鐘，再

迅速倒入石英比色皿中，

2 分 30 秒時(shí)讀取吸光度值 A2；

⑤、求出 2 次吸光度差值（△A=A1-A2）。

[注]：第一次讀數(shù)時(shí)的時(shí)間可以不固定(20 秒、40 秒等都可

以，但不要太長(zhǎng))，只要讀 A1 和 A2 之間的時(shí)間差為

2 分鐘即可；如果 A1 和 A2 值接近，可以選擇更大的

樣本濃度，或者延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（如 5min 或 10min）。

3、組織勻漿中 GR 活力單位的計(jì)算：

①、組織勻漿中 GR 活力單位的定義：

每克組織蛋白每分鐘使反應(yīng)體系中底物 NADPH 的

濃度改變 1mM 所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

6.22 為 NADPH 在 340nm 波長(zhǎng) 1cm 光徑的消光系數(shù)。

d：比色光徑，1cm；

T：反應(yīng)時(shí)間，2min；

V 樣：取樣量，0.05mL；

N：樣本測(cè)試前稀釋倍數(shù)。

Cpr：組織勻漿蛋白濃度，gprot/mL（prot 指蛋白）

谷-胱甘肽還原酶(GR)測(cè)試盒